豬圓環(huán)病毒 3-dCap-ELISA 抗體試劑盒造作指南

【獸用名稱】

通 用 名  豬圓環(huán)病毒 3-dCap-ELISA 抗體檢測試劑盒

商 品 名  無

英 文 名  Porcine circovirus 3-dCap antibody ELISA kit

漢語拼音  Zhuyuanhuanbingdu 3-dCap-ELISA Kangtijiance Shijihe

【主要組分與含量】

【作用與用途】  用于檢測豬圓環(huán)病毒 3 型抗體。

【注意事項】

（1）實驗前，將試劑盒所有組分取出置溫箱（25℃± 3） 回溫至少30 分鐘，實驗完成后 放回2～8℃保存。

（2）若試劑盒陰陽性對照、酶標記物出現(xiàn)少量懸浮物，屬正常現(xiàn)象。

（3）請在試劑盒規(guī)定的有效期內(nèi)使用；禁止非同批試劑盒混用。

（4）沒有用完的抗原包被板應(yīng)貯存在密封塑料袋內(nèi)，于 2～8℃存放。

（5）避免底物顯色液暴露于強光，避免接觸氧化劑。

（6）先使用血清稀釋板稀釋完所有的待檢血清，再將稀釋好的血清轉(zhuǎn)移到抗原包被板上， 使反應(yīng)時間一致。

（7）濃縮洗滌液用蒸餾水或純水稀釋，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶加熱使其溶解后再使用。

（8）嚴格按照操作程序，仔細的吸液、計時，充分洗滌，對于獲得精確的結(jié)果是非常必 要的。

【用法與判定】

1    用法

1. 1    樣品準備  取動物全血，待血液凝固后， 以 4000r/min 離心 10 分鐘，收集血清； 或待血液凝固后自然析出血清，再收集血清。血清應(yīng)清亮，無溶血。

1.2    洗滌液配制  使用前，將 20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水或純水作 20 倍稀釋（例如： 10ml 的濃縮洗滌液加上 190ml 純水），混勻。置 2～8℃保存，可保存 7 日。

1.3    待檢血清和對照的稀釋

1.3. 1    待檢血清的稀釋  將待檢血清在血清稀釋板中按 1:40 稀釋（例如：195μl 樣品稀 釋液中加 5μl 待檢血清）。

1.3.2    對照的稀釋  陰、陽性對照按 1:4 稀釋（例如：180μl 樣品稀釋液中加 60μl 對照）。

1.4    操作步驟

1.4. 1    取抗原包被板（根據(jù)樣品多少，可拆開分次使用），每孔加入稀釋好的洗滌液  300µl ，無需靜置，甩掉孔中的洗滌液，重復洗滌共計 2 次，最后一次在吸水材料上拍干。

1.4.2    將稀釋好的待檢血清、陰性對照和陽性對照各取 100μl 加入到抗原包被板中，待 檢血清設(shè) 1 孔，陰、陽性對照各設(shè) 2 孔。輕輕振勻孔中樣品（勿溢出），置 37℃溫育 30 分 鐘。

1.4.3    甩掉板孔中的液體，每孔加入稀釋好的洗滌液 300µl ，無需靜置，甩掉板孔中的 洗滌液，重復洗滌共計 5 次，最后一次在吸水材料上拍干。

1.4.4    每孔加入酶標記物 100μl ，置 37℃溫育 30 分鐘。

1.4.5    洗板 5 次，方法同 1.4.3。

1.4.6    每孔加入底物顯色液 100μl ，置室溫（20~25℃) 避光顯色 10 分鐘。

1.4.7    每孔加入終止液 50µl ，10 分鐘內(nèi)在酶標儀上測各孔 OD630nm 值。

2    判定

2. 1    成立條件  陽性對照 OD630nm 平均值≥0.5 ，陰性對照 OD630nm 平均值＜0.3。

2.2    判定標準  S 為樣品 OD630nm 值，P 為陽性對照 OD630nm 平均值，N 為陰性對照 OD630nm 平均值。

如果樣品（S-N）/（P-N）值≥0.16 ，判為陽性；

如果樣品（S-N）/（P-N）值＜0.16 ，判為陰性。

【規(guī)格】  96 孔/盒或192 孔/盒

【貯藏與有效期】  2～8℃保存，有效期為 12 個月 

僅供科研使用